7-1. 遺伝子組換え実験におけるベクター

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1) ベクターとは

目的DNAを組込んで細胞に道入させるためのDNA

ベクターに連結させたDNA

ベクターが道入された細胞

ウイルスの殻(カプシド?)や人工脂質二重膜なども細胞にDNAを運ぶことができるが通常はベクターとはいわない

ただし、法の解釈とは別に、時として核酸を運ぶ担体全般をベクターということがある

ベクター使用目的の1つはDNAの増幅

そのようなベクターはその細胞で増えることのできる複製起点(ori)をもつ

宿主とベクターの関係は厳密に決まっている

大腸菌専用のベクターは酵母では増えない

多くのベクターは遺伝子を発現させる機能を持ち、また種類によっては遺伝子をゲノムへ組込む機能を持つ

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この法ではベクターは組換えDNAの導入と複製を行うものと定義される

ベクター機能をもつウイルスは厳密には生物とはいえないが、報ではベクター機能をもつ生物ということで、生物として括られている

法解釈と学術的解釈にはこのような不一致がいくつかある

2) ベクターの種類と条件

ベクターの材料となるもの

ベクターに求められる条件

1. 制限酵素認識部位をもち、DNA組換え操作が容易にできる

2. その存在を細胞で検出するための選択マーカー遺伝子

3. 多くの場合、複製や遺伝子発現のための制御配列をもつ

3) クローニング

遺伝的に同一であることを示す用語

遺伝子組換え実験では、ベクターにインサートが連結するなどした状態の組換えDNAが1つの細胞に1種類だけ存在することを前提としているが、そのような個々の細胞や細胞集団もクローンという

ここから、特定の組換えDNAそのものもクローンといい、ベクターを使って1種類のDNAのみを純粋に増幅させることをクローニング(クローン化)という

クローン化DNAやその一部をさらにクローニングする操作はサブクローニングという